UV0.3%贯叶连翘提取物真假区分方法
方法一：
取适量（0.5g左右）的贯叶连翘提取物，用分析甲醇20ml溶解后查看颜色，应为茶红色。
结论：如颜色为茶红色则是真货，如出现黑色或者呈黑绿色，则为添加物。
方法二：
贯叶金丝桃素的含量测定
D.1 方法提要
样品经超声提取后，采用反相高效液相色谱法测定，以外标法定量。
D.2 仪器和用具
D.2.1 分析天平，精度为十万分之一。
D.2.2 超声波清洗仪：250W，20kHz。
D.2.3 高效液相色谱仪（附紫外检测器）。
D.3试剂和溶液
D.3.1 乙腈，色谱纯。
D.3.2 甲醇，色谱纯、分析纯。
D.3.3 水，二次蒸馏水。
D.3.4 磷酸二氢钠，分析纯。
D.3.5 贯叶金丝桃素对照品：纯度95%以上，使用前应在放有五氧化二磷的减压干燥器内干燥24h。
D.4 色谱条件及系统适用性
D.4.1 色谱条件
a） 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱。
b） 流动相：甲醇-乙腈-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液（200:300:100），经0.45μm滤膜过滤备用。
c） 流速：0.8mL/min。
d） 检测波长：284nm。
D.4.2 系统适用性
理论塔板数按贯叶金丝桃素峰计算应不低于2000。
D.5 操作方法
D.5.1 取样
参照《中华人民共和国药典》2000年版一部附录ⅡA的方法取样。
D.5.2 对照品溶液的制备
精密称取贯叶金丝桃素对照品约5mg，置于50mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。此溶液1mL含贯叶金丝桃素约0.1mg。
D.5.3 供试品溶液的制备
取贯叶连翘提取物粉末约0.15g，精密称定，置于50mL棕色量瓶中，加入约40mL甲醇，超声提取30min后取出，放置至室温，加甲醇溶液至刻度，摇匀。用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液置于棕色试样瓶中，即得供试液。
D.5.4 测定方法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5μl注入液相色谱仪，按外标法测定含量。
1）贯叶金丝桃素化学性质不稳定，对照品、供试品溶液配制后应在2h内检测。
D.6 结果计算
贯叶连翘提取物中贯叶金丝桃素的含量按式（D1）计算：
AX×C×V
贯叶金丝桃素= ×100％
AS×m
式中：
AX———供试品溶液色谱图中贯叶金丝桃素的峰面积；
AS———对照品溶液色谱图中贯叶金丝桃素的峰面积；
C———对照品溶液中贯叶金丝桃素的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；
V———供试品溶液的体积，单位为毫升（mL）；
m———试样的称样量，单位为毫克（mg）。
结论：如检测贯叶金丝桃素含量在3%左右则为真货，反之为添加物。
方法三：
一，高效液相色谱法条件：
专栏： inertsil消耗臭氧物质- 3 4.6 × 150毫米5 μ m的
流速： 1.0毫升/分钟
检测： 588 nm的
流动相：甲醇： acetomitrile ： nah2po3 （ 0.1mol/l） （ 300:50 ： 50 ， V / V）的
灵敏度： 0.01aufs
柱温： 25 ℃
进样量： 10 μ升
二.解决的制备
1 .标准的准备工作：
精密称取约2 mg金丝桃素的标准置25毫升容积瓶。用甲醇：吡啶（ 9:1）溶解稀释至刻度。
2 .样品制备：
精密称取约为200mg的贯叶连翘置25毫升容积瓶中，加流动相sonicate为1小时，冷却至室温。用流动相稀释到刻度，0.45 μ m的微孔滤膜过滤器过滤。注入液相色谱仪中，测定。
三.计算
保留时间约15分钟。用外标法计算含量。
结论：如检测出金丝桃素成分在0.1%左右则为真货，反之则为添加物。
备注：本方法仅为我公司人员技术经验总结，无相关机构证明。
